細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)白色絮狀物的原因

細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)白色絮狀物，污染因素是最常見的原因之一。

細胞培養(yǎng)實驗室的環(huán)境要求極為嚴格，任何微小的污染都可能導致細胞培養(yǎng)失敗。細菌、真菌、霉菌和支原體等微生物污染是細胞培養(yǎng)中常見的問題。細菌污染后，培養(yǎng)液通常會變得渾濁，顏色變黃，顯微鏡下可見黑色細沙狀或桿狀物，其代謝產(chǎn)物會導致培養(yǎng)液的pH值急劇下降。真菌污染則相對隱蔽，培養(yǎng)液可能保持清亮，但在顯微鏡下可見絲狀物或珊瑚狀結構，隨著時間推移，可能會出現(xiàn)黑色絲狀物。霉菌污染早期難以察覺，培養(yǎng)液清亮，但會出現(xiàn)絮狀雜質，鏡下可見細絲狀團狀漂浮物。支原體污染更為隱蔽，培養(yǎng)液一般不會渾濁，pH值也無明顯變化，但細胞生長會逐漸變慢，最終可能導致細胞死亡。

此外，操作過程中的不規(guī)范行為也是導致污染的重要因素。實驗人員進入培養(yǎng)室前未更換專用實驗服和拖鞋，未洗手或未戴口罩和手套，頻繁出入培養(yǎng)室，都可能將外界微生物帶入培養(yǎng)環(huán)境中。在操作過程中，未靠近火焰進行操作，試劑瓶未經(jīng)火焰灼燒消毒，吸管使用不當，細胞和培養(yǎng)基的敞口時間過長等，都可能增加污染的風險。一旦發(fā)生污染，不僅會影響細胞的生長和實驗結果的準確性，還可能導致整個細胞培養(yǎng)體系的崩潰。

培養(yǎng)基成分問題

培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的核心成分，其質量直接影響細胞的生長狀態(tài)。培養(yǎng)基中的成分問題也可能導致細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)白色絮狀物。培養(yǎng)基中的鹽類成分如果濃度過高或過低，可能導致細胞生長異常，甚至出現(xiàn)沉淀物。例如，培養(yǎng)基中的NaHCO3濃度不正確，會影響培養(yǎng)液的pH值緩沖能力，進而影響細胞的生長環(huán)境。此外，培養(yǎng)基中的氨基酸、維生素等營養(yǎng)成分如果不足或比例失調(diào)，也可能導致細胞代謝異常，產(chǎn)生絮狀物。

培養(yǎng)基的保存條件也極為重要。培養(yǎng)基應放置于4℃，避光保存，并盡量在一周內(nèi)使用完畢。如果培養(yǎng)基在保存過程中發(fā)生變質或受到污染，也可能導致細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)異常現(xiàn)象。例如，培養(yǎng)基中的谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，產(chǎn)生氨，而氨對于一些細胞具有毒性。此外，培養(yǎng)基中的酚紅作為pH值指示劑，可能會干擾某些檢測實驗，因此在進行流式細胞檢測時，建議使用不加酚紅的培養(yǎng)基。

總之，細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)白色絮狀物的原因多種多樣，污染因素和培養(yǎng)基成分問題是其中最常見的原因。為了確保細胞培養(yǎng)的成功，必須嚴格遵守無菌操作規(guī)范，定期檢測培養(yǎng)環(huán)境和培養(yǎng)基的質量，及時發(fā)現(xiàn)并處理潛在的問題。

4. 診斷與檢測方法

4.1 顯微鏡觀察

顯微鏡觀察是診斷細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)白色絮狀物的重要手段，能夠快速、直觀地識別問題的性質。

低倍鏡觀察：低倍鏡下可以初步判斷絮狀物的大致形態(tài)和分布情況。如果絮狀物呈現(xiàn)明顯的絲狀或珊瑚狀結構，可能是真菌污染；如果培養(yǎng)液中出現(xiàn)大量細小的顆粒狀物，且分布較為均勻，可能是細菌污染。此外，還可以觀察細胞的整體生長狀態(tài)，如細胞是否貼壁良好、形態(tài)是否正常等，從而初步判斷絮狀物對細胞生長的影響程度。

高倍鏡觀察：高倍鏡下可以更清晰地觀察絮狀物的細節(jié)特征。對于細菌污染，高倍鏡下可以看到細小的桿狀或球狀細菌，甚至可以觀察到細菌的運動；對于真菌污染，高倍鏡下可以看到真菌的菌絲和孢子，菌絲通常呈現(xiàn)細長的絲狀結構，孢子則可能呈現(xiàn)不同的形態(tài)和顏色。此外，還可以觀察細胞內(nèi)部的結構變化，如細胞核是否正常、細胞質中是否有異常顆粒等，從而進一步判斷細胞是否受到污染或損傷。

相差顯微鏡觀察：相差顯微鏡可以觀察細胞和絮狀物的細微結構和光學差異。對于細胞代謝產(chǎn)物導致的絮狀物，相差顯微鏡下可以看到絮狀物與細胞之間的相對位置和相互關系，從而判斷絮狀物是否與細胞代謝有關。此外，相差顯微鏡還可以觀察細胞的生長狀態(tài)和代謝活動，如細胞的分裂、吞噬等現(xiàn)象，從而為診斷絮狀物的性質提供更多的線索。