細(xì)胞培養(yǎng)污染源及其挽救措施

　　在細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染時(shí)，我們應(yīng)該如何減少損失，避免后續(xù)培養(yǎng)重蹈覆轍。

　　污染來源

　　污染物進(jìn)入培養(yǎng)系統(tǒng)有許多不同的途徑。**種是通過組織培養(yǎng)材料。我們?cè)谑褂们皯?yīng)對(duì)所有培養(yǎng)使用到的塑料耗材和玻璃器皿進(jìn)行消毒，盡管許多耗材已經(jīng)在售出前進(jìn)行了消毒，但我們?cè)诖蜷_包裝時(shí)還應(yīng)小心污染。

　　此外，組織培養(yǎng)液，如培養(yǎng)基、血清和PBS等培養(yǎng)過程中使用的液體，也應(yīng)過濾除菌(過0.22μm孔徑的膜)。我們?cè)趩⒎馀囵B(yǎng)用的試劑時(shí)，應(yīng)該檢測(cè)其是否被污染(無菌培養(yǎng))。進(jìn)入組織培養(yǎng)柜的所有設(shè)備應(yīng)噴灑70%乙醇或替代消毒劑(例如：稀釋的次氯酸鹽或1%苯扎氯銨)。

　　從水浴鍋中取出的瓶子，這些應(yīng)該用乙醇噴灑表面殺菌，因?yàn)樗『罂梢杂行У貙⒄婢剿鼈兊耐獗砻妗ＥK的實(shí)驗(yàn)服是另一個(gè)極好的污染源。在潔凈工作臺(tái)的無菌環(huán)境中工作，應(yīng)注意避免持續(xù)或不必要地進(jìn)出潔凈工作臺(tái)。應(yīng)盡可能減少氣溶膠產(chǎn)生(一般使用吸引器的時(shí)候容易產(chǎn)生)。培養(yǎng)物或培養(yǎng)基發(fā)生溢出時(shí)，應(yīng)立即清洗。此外應(yīng)定期徹底清洗培養(yǎng)箱和潔凈工作臺(tái)。培養(yǎng)操作時(shí)盡量減少細(xì)胞培養(yǎng)室的人員走動(dòng)，減少培養(yǎng)箱的開閉，以此來降低微生物傳播的可能性!

　　最后，傳播污染的一種常見方式是將細(xì)胞系從另一個(gè)位置轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室新引入的細(xì)胞系應(yīng)謹(jǐn)慎隔離和處理，直到證明不含微生物，除非在轉(zhuǎn)移前已確認(rèn)不含微生物(例如，如果從正規(guī)的細(xì)胞庫中獲得)。

　微生物污染的預(yù)防和抗生素的使用

　　防止微生物污染的基石是無菌技術(shù)的踐行。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中抗生素從不缺席，但出于多種原因，通常不鼓勵(lì)使用。首先，優(yōu)秀無菌技術(shù)的實(shí)施使抗生素的添加變得不必要。盡管抗生素可能會(huì)抑制微生物污染，但它們可能無法徹底消除污染，并且可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生耐藥性微生物。

　　無菌技術(shù)不佳不應(yīng)依賴抗生素使用來改善，重要的是盡早發(fā)現(xiàn)污染源。有一項(xiàng)數(shù)據(jù)分析支持了這一觀點(diǎn)：①72%在抗生素中連續(xù)生長的培養(yǎng)物顯示支原體呈陽性，而在沒有抗生素的情況下僅7%培養(yǎng)物被感染。②抗生素可能會(huì)影響培養(yǎng)細(xì)胞的生化數(shù)據(jù)，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　　短期使用抗生素在許多不同情況下可能具有有用的戰(zhàn)略價(jià)值。其中包括原始樣品的初始培養(yǎng)(如原代細(xì)胞的分離)以及處理受污染的樣品(已經(jīng)是實(shí)驗(yàn)室獨(dú)苗的那種，或者是非常非常珍貴的)。后者將取決于污染程度，并且僅在污染程度仍處于相對(duì)早期階段時(shí)才可行。在大多數(shù)情況下，受污染的培養(yǎng)物應(yīng)立即進(jìn)行高壓滅菌，廢棄!

污染培養(yǎng)物的挽救措施

　　對(duì)于那些是實(shí)驗(yàn)室獨(dú)苗且異常珍貴的培養(yǎng)物，他們?nèi)绻晃廴玖耍谠缙谙廴究赡苁强尚械摹Ｊ紫任覀円_定污染類型(細(xì)菌、真菌、酵母或支原體)，然后我們可以使用Zell Shield?，細(xì)胞支原體去除劑，該產(chǎn)品是通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成，有效抑制上述微生物的增殖。無細(xì)胞毒性，采用復(fù)合支原體敏感抗生素，對(duì)大多數(shù)細(xì)胞株無毒。在細(xì)胞培養(yǎng)期間，Zell Shield?始終保持穩(wěn)定的活性。Zell Shield?為無菌溶液，可直接加入培養(yǎng)基使用。