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原代細(xì)胞培養(yǎng)小技巧(一)

2022-05-19 10:42來源:威正翔禹|締一生物

原代細(xì)胞培養(yǎng)

原代細(xì)胞培養(yǎng)也被稱為初代培養(yǎng),是建立細(xì)胞系的**步。


原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用廣泛:

  1. 為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段;

  2. 為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;

  3. 服務(wù)于臨床實(shí)踐,用于藥物篩選等。

其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持


原代細(xì)胞培養(yǎng)需要一定的技巧,尤其是一些細(xì)節(jié),不然很容易翻車,今天給大家匯總了一些原代細(xì)胞培養(yǎng)的小技巧,希望大家能有所收獲!


取材 .


取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中的**步,也是至關(guān)重要。

下表為一些常見組織的取材注意事項(xiàng)。


圖片

分離 .


一、組織塊培養(yǎng)法


1、組織塊接種后的前3天,在觀察和移動(dòng)的過程中,注意不要引起液體的振蕩。為保證組織塊附著于瓶壁上,要避免頻繁晃動(dòng)。


2、加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。


3、當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長。


4、為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。


二、貼壁型原代細(xì)胞


1、原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞,在初次接觸體外環(huán)境時(shí),細(xì)胞之間會(huì)互相影響,產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì),促進(jìn)彼此的存活和生長。


因此,接種密度要適宜。如果接種的細(xì)胞密度過低,細(xì)胞之間的促生長作用很小,也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨(dú)立生存環(huán)境的變化過程;如果接種的細(xì)胞密度過大,會(huì)導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足,代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。


2、盡快使接種的細(xì)胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h,待細(xì)胞貼壁后,再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。


三、懸浮型原代細(xì)胞


1、必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)。可以通過增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài),如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液,以5ml為最低限度,否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快,否則既容易使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下,可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。


2、能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,其生命力一般都比較旺盛,體外分裂增殖的速度較快,營養(yǎng)成分消耗大,換液時(shí)間隔一般較短。

培養(yǎng)


當(dāng)原代細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,就可按照正常細(xì)胞培養(yǎng)流程進(jìn)行培養(yǎng)即可。

血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻:


  • 提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。

  • 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

  • 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。

  • 是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

  • 起酸堿度緩沖液作用。

  • 提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

  • 參與細(xì)胞凍存。

    ......


一款優(yōu)質(zhì)的血清,絕對能成為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的“最強(qiáng)輔助”。


Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比,有獨(dú)特優(yōu)勢:

圖片


1. 精選內(nèi)毒素更低批次(≤3EU/ml),原裝進(jìn)口。是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

2. 新批次在試用前,提供試用服務(wù),養(yǎng)細(xì)胞更放心。

3. 每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升,試用滿意的實(shí)驗(yàn)室批號優(yōu)先鎖定,保證大多數(shù)項(xiàng)目兩年不需換批次,細(xì)胞試驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產(chǎn)順序,會(huì)有多批次平行供應(yīng),每個(gè)實(shí)驗(yàn)室專屬批號管理,保證供貨穩(wěn)定。

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