制藥、科研與臨床檢查支原體的區(qū)別

支原體是一種大小在0.1~0.3μm的原核生物，在自然界廣泛分布，迄今已發(fā)現(xiàn)150多種，其中90多種可寄生于人、動(dòng)物、植物等真核細(xì)胞并大量繁殖。

在科研領(lǐng)域，細(xì)胞體外培養(yǎng)和細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)是常見的實(shí)驗(yàn)室操作，需定期對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清及培養(yǎng)基等進(jìn)行支原體的監(jiān)測(cè)，以避免支原體污染細(xì)胞和干擾實(shí)驗(yàn)。

在從事疫苗、重組蛋白、單克隆抗體生產(chǎn)的生物制藥行業(yè)，由于采用了大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)工藝，同樣需要對(duì)工作細(xì)胞、檢定細(xì)胞及生物制品進(jìn)行支原體的檢查，以達(dá)到藥典限定的標(biāo)準(zhǔn)。與之類似的，干細(xì)胞治療、CAR-T免疫治療等，也同樣可歸結(jié)到制藥領(lǐng)域。

還有一類領(lǐng)域是臨床。由于有些支原體會(huì)造成人體或牲畜疾病，因此當(dāng)懷疑有感染癥狀時(shí)，也需要進(jìn)行支原體檢查，以確診后對(duì)癥下藥。常見的致病支原體有肺炎支原體（引發(fā)人的呼吸道感染）、解脲脲原體和人型支原體（引發(fā)人的泌尿生殖系感染）以及牛支原體（引發(fā)小牛肺炎）等。

那么這三個(gè)領(lǐng)域在支原體檢查方面有什么區(qū)別呢？

在科研領(lǐng)域，由于細(xì)胞培養(yǎng)基中含有牛血清，營養(yǎng)豐富，支原體在里面很容易繁殖。一旦污染，則支原體的密度較高。因此，科研領(lǐng)域的支原體檢測(cè)，對(duì)于方法的靈敏度要求不高。PCR、DNA染色法、熒光素酶法都是常見的檢測(cè)方法。

與科研領(lǐng)域不同，制藥領(lǐng)域?qū)χгw檢查方法的要求較高。傳統(tǒng)藥典方法為培養(yǎng)法和DNA染色法。但由于時(shí)間較長，近年又興起支原體的快檢方法，以 qPCR和PCR方法為代表，只要其特異性、靈敏度和耐用性都能達(dá)到歐洲藥典的要求，就能替代傳統(tǒng)藥典方法，用于內(nèi)部質(zhì)檢和放行檢測(cè)。

圖. 德國MB的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(Venor?Gem qEP)經(jīng)過廠家的方法驗(yàn)證，符合歐洲和日本藥典標(biāo)準(zhǔn)

在臨床領(lǐng)域，支原體診斷常見兩種方法:一是標(biāo)本采集后用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行支原體分離培養(yǎng)，待長出典型菌落后，再進(jìn)一步做生化鑒定和血清學(xué)鑒定;二是用PCR或DNA探針等技術(shù)檢查支原體DNA。無論采用哪種方法，所使用的試劑盒都需要有國家醫(yī)療器械注冊(cè)證后才能使用。

在科研和工業(yè)領(lǐng)域，就筆者所知，德國MB公司（全稱Minerva Biolabs）即提供有分別適合不同領(lǐng)域的支原體檢測(cè)試劑盒。其中工業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用的Venor?Gem qEP試劑盒和Venor? Gem Classic試劑盒經(jīng)過MB公司的方法學(xué)驗(yàn)證，被廣大藥企所采用。

MB公司還提供有10CFU?支原體高敏標(biāo)準(zhǔn)品和拷貝數(shù)標(biāo)定的支原體基因組DNA等全面配套的產(chǎn)品，方便藥企對(duì)PCR/qPCR方法的自我驗(yàn)證。

圖. 德國MB的10CFU?支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品，用于支原體PCR/qPCR的靈敏度和耐用性驗(yàn)證。